Um pesquisador, durante seus experimentos para obtenção de anticorpos monoclonais, conseguiu selecionar…

Question

Um pesquisador, durante seus experimentos para obtenção de anticorpos monoclonais, conseguiu selecionar apenas os hibridomas advindos da fusão celular entre linfócitos B e mielomas. Seu cultivo apresenta agora uma mistura de hibridomas, com anticorpos contra diferentes regiões do antígeno-alvo sendo produzidos em um mesmo poço.

Entre os procedimentos a seguir, qual o pesquisador deve adotar para garantir que os anticorpos secretados sejam monoclonais e específicos?

Accepted Answer

Diluição limitante das células, confirmação do número de células por poço e, após o crescimento celular, o sobrenadante obtido da cultura deve ser submetido a uma avaliação dos anticorpos presentes por meio do método imunoenzimático ELISA.

Answer

Extração de DNA genômica das células, seguida de digestão enzimática para análise pela técnica de pulsed-field gel electrophoresis.

Answer

Espectrometria de massa para identificação das proteínas produzidas pelas células e, com as sequencias obtidas, iniciar um novo ciclo de imunizações.

Answer

Substituição do meio de cultura por PBS e monitoramento de morte celular até estar presente apenas uma célula por poço. Neste ponto, adicionar meio nutritivo para crescimento celular seguido de avaliação do sobrenadante por PCR.

Answer

Imunocromatografia para identificação das regiões de ligação dos anticorpos e isolamento das células.

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